Fluorochrom-Bänderung
Für die DAPI-Bänderung wurden die Polytänchromosomen 10 min
mit 4',6-Diamidin-2-phenylindol (DAPI) gefärbt.
Um eine farbliche
Differenzierung in Form einer blau-rosa-weißen Bänderung zu
erhalten, wurden die Präparate mit einem Gemisch aus DAPI und
Propidiumiodid (DAPI/PI) gefärbt. Als Ausgangsmaterial dienten dazu
vorbehandelte Präparate, die älter als 24 Stunden waren oder
Präparate nach der FISH.
Durchführung
- frische Färbelösung herstellen und vor Licht geschützt aufbewahren
- Präparate mindestens über Nacht in 60 ml Färbelösung an einen dunkeln Ort bei RT stellen
- OT kurz in PBS abspülen und abtropfen lassen
- Präparate in jeweils 10 µl Einbettmedium einschließen und mindestens 30 min im Dunkeln liegen lassen bevor sie im Fluoreszenzmikroskop bei UV-Anregung (auch bei DAPI/PI) untersucht werden
Chemikalien und Lösungen
- DABCO: Diazabicyclo[2.2.2]octan (Sigma)
- DAPI-Stammlösung: 0,2 mg/ ml
- 4',6-Diamidin-2-phenyl-indol2HClH20 (Serva) in Aqua dest.
- Propidiumiodid-Stammlösung: 1 mg/ml Propidiumiodid in Aqua dest.
- Färbelösung: 20 µl DAPI-Stammlsg. und 20 µl PI-Stammlösung in 60 ml PBS
- PBS: 0,13 M NaCl, 0,007 M NaH2PO4, 0,03 M Na2HPO4, pH 7,4
- Einbettmedien entweder: a) Vectashield (Serva) oder b) 1 Teil Tris-HCl pH 7,4
und 9 Teile Glycerin mit 2,3% (w/v) DABCO und 0,02% NaN3
- DABCO: Diazabicyclo[2.2.2]octan (Sigma)
- DAPI-Stammlösung: 0,2 mg/ ml
- 4',6-Diamidin-2-phenyl-indol2HClH20 (Serva) in Aqua dest.
- Propidiumiodid-Stammlösung: 1 mg/ml Propidiumiodid in Aqua dest.
- Färbelösung: 20 µl DAPI-Stammlsg. und 20 µl PI-Stammlösung in 60 ml PBS
- PBS: 0,13 M NaCl, 0,007 M NaH2PO4, 0,03 M Na2HPO4, pH 7,4
- Einbettmedien entweder: a) Vectashield (Serva) oder b) 1 Teil Tris-HCl pH 7,4 und 9 Teile Glycerin mit 2,3% (w/v) DABCO und 0,02% NaN3