Charakterisierung der Polytänchromosomen aus dem Embryosuspensor von Phaseolus coccineus L.

• 1 EINLEITUNG
  • 1.1 Allgemeines über Polytänchromosomen
  • 1.2 "Klassische" Polytänchromosomen
    • 1.2.1 Dipteren
    • 1.2.2 Ciliaten
  • 1.3 Polytänchromosomen bei Pflanzen
  • 1.4 Polytänchromosomen bei Phaseolus
    • 1.4.1 Vorkommen und Polyploidiegrad
    • 1.4.2 Charakterisierungen der Phaseolus-Polytänchromosomen
      • 1.4.2.1 Beschreibung der Morphologie
      • 1.4.2.2 Markierungen und Bänderung
      • 1.4.2.3 In situ-Hybridisierungen
  • 1.5 Mini- und Mikrosatelliten als DNA-Sonden
  • 1.6 Ziel der Arbeit
• 2 MATERIAL UND METHODEN
  • 2.1 Anzucht und Fixierung des Pflanzenmaterials
  • 2.2 Chromosomenpräparation
  • 2.3 Vorbehandlung
    • Abbau der Proteine
    • Abbau der RNA
  • 2.4 Fluorochrom-Bänderung
  • 2.5 DNA-Sonden
    • 2.5.1 Sonden aus klonierten DNA Sequenzen
      • 2.5.1.1 Sondenherstellung aus Plasmid-Klonen und Markierung
      • 2.5.1.2 Sondenherstellung und Markierung mittels PCR
    • 2.5.2 Synthetische Oligonukleotide als DNA-Sonden
      • 2.5.2.1 Endmarkierte Oligonukleotide
      • 2.5.2.2 Tailing von Oligonukleotiden
    • 2.5.3 Ethanolfällung und Überprüfung der Einbaueffizienz
  • 2.6 Fluoreszenz-in situ-Hybridisierung
    • 2.6.1 Hybridisierungen
      • 2.6.1.1 Hybridisierungen mit klonierten DNA Sequenzen
      • 2.6.1.2 Hybridisierungen mit endmarkierten Oligonukleotiden
      • 2.6.1.3 Hybridisierungen mit getailten Oligonukleotiden
    • 2.6.2 Detektionssysteme
      • 2.6.2.1 Direkte Detektion
      • 2.6.2.2 Avidin/Biotin
      • 2.6.2.3 Signalamplifikation für Digoxigenin-markierte Sonden
      • 2.6.2.4 Digoxigenin-Biotin-Amplifikations-System
  • 2.7 Mikroskopie und Bild-Dokumentation
  • 2.8 Karyotypisierung
• 3 ERGEBNISSE
  • 3.1 Präparation
  • 3.2 Definition von "Euchromatin" und "Heterochromatin"
  • 3.3 Morphologische Merkmale der Polytänchromosomen
    • 3.3.1 Centromernahes Heterochromatin (cHC)
    • 3.3.2 Nukleolus-organisierende Region
    • 3.3.3 Telomerisches Heterochromatin (tHC)
    • 3.3.4 Polytäne Strukturen
  • 3.4 Karyotypisierung
    • 3.4.1 Längenmessungen
    • 3.4.2 Chromosomenbeschreibungen
      • 3.4.2.1 Chromosom A
      • 3.4.2.2 Chromosom B
      • 3.4.2.3 Chromosom C
      • 3.4.2.4 Chromosom D
      • 3.4.2.5 Chromosom E
      • 3.4.2.6 Chromosom F
      • 3.4.2.7 Chromosom G
      • 3.4.2.8 Chromosom H
      • 3.4.2.9 Chromosom I
      • 3.4.2.10 Chromosom J
      • 3.4.2.11 Chromosom K
    • 3.4.3 Karyogramm und Idiogramm
  • 3.5 Fluoreszenz-in situ-Hybridisierung (FISH)
    • 3.5.1 Loci der klonierten DNA-Sequenzen
    • 3.5.2 Loci der Mikrosatelliten
      • 3.5.2.1 Hybridisierungssignale der Dinukleotid-Motive
      • 3.5.2.2 Hybridisierungssignale der Trinukleotid-Motive
      • 3.5.2.3 Hybridisierungssignale der Tetranukleotid-Motive
      • 3.5.2.4 Loci GC-reicher Mikrosatelliten
    • 3.5.3 Loci der Telomer-Sequenz und der Minisatelliten
    • 3.5.4 Cytogenetische Karte
    • 3.5.5 Basenzusammensetzung der cHC-Bereiche
• 4 DISKUSSION
  • 4.1 Präparation
  • 4.2 Morphologische Merkmale der Polytänchromosomen
    • 4.2.1 Variable Merkmale
    • 4.2.2 Centromerisches Heterochromatin (cHC)
      • 4.2.2.1 Merkmale des cHC
      • 4.2.2.2 Fluorochrom-Bänderung
    • 4.2.3 Chromosomen mit Nukleolus-organisierender Region
    • 4.2.4 Telomerisches Heterochromatin
    • 4.2.5 Querbänderungen und Chromatidenbündel
  • 4.3 Karyotypisierung
  • 4.4 Fluoreszenz-in situ-Hybridisierung (FISH)
    • 4.4.1 Vorbehandlung mit Signalamplifikation
    • 4.4.2 Lokalisation der 18-25S und 5S ribosomalen RNA Gene
    • 4.4.3 Verteilung von Mikrosatelliten
    • 4.4.4 Lokalisation der Minisatelliten
    • 4.4.5 Arabidopsis Telomer-Sequenz
  • 4.5 Vergleich mit Metaphasechromosomen
  • 4.6 Ausblick
• 5 ZUSAMMENFASSUNG
• 6 LITERATUR
• 7 ANHANG
  • 7.1 Abkürzungen
  • 7.2 Publikationsliste
  • 7.3 Lebenslauf